細胞進(jìn)行培養后,需要對其生長(cháng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀(guān)察。由于細胞小而復雜,若不借助適當的手段,難以觀(guān)察其形態(tài)、結構,更難發(fā)現細胞內各種組分的分子組成及功能。目前,已有多種研究細胞的技術(shù),從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡,從一般細胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細胞染色是研究細胞生物學(xué)特征的一種常用手段,然而,對于細胞實(shí)驗新手來(lái)說(shuō),想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì )選、細胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題。
細胞染色是生物學(xué)研究中常用的技術(shù),它涉及到使用特定的染料或熒光探針來(lái)觀(guān)察和分析細胞的結構和功能。以下是一些常見(jiàn)的細胞染色方法和染料:
瑞氏染色(Wright's stain)
染液主要由堿性染料亞甲藍(美藍)和酸性染料伊red溶于甲醇配置形成。操作簡(jiǎn)單,染色時(shí)間短,對細胞質(zhì)成分及中性顆粒染色效果較好。染色效果較差,容易退色,對細胞核染色效果較姬姆薩染色法差。保存時(shí)間短,適用于臨時(shí)性檢驗,如血涂片血細胞分析。
姬姆薩染色(Giemsa's stain)
染液主要由堿性染料天青色素、酸性染料伊red、甘油和甲醇配制而成。染色效果好,對細胞核和寄生蟲(chóng)等效果較好,染色后保存時(shí)間長(cháng)退色緩慢。染色時(shí)間較長(cháng),成本比較高,對細胞質(zhì)成分及中性顆粒染色效果較差。適用于寄生蟲(chóng)檢測或需要長(cháng)期保存的標本涂片。
瑞-姬氏染色(Wright- Giemsa's stain)
為復合染色法,結合了瑞氏染色和姬姆薩染色的優(yōu)點(diǎn)。染色時(shí)間短,染色效果好,成本比姬姆薩染色法低。不易退色,適用于臨時(shí)性寄生蟲(chóng)或血涂片等檢查。
巴氏染色(Papanicolaou stain)
染液主要由蘇木素、橘黃G6(含橘黃G、磷鎢酸等)、藍化液、EA50(含淡綠、伊red、乙酸、磷鎢酸等)或EA36(含淡綠、伊red、磷鎢酸等)組成。染色效果好,細胞著(zhù)色鮮艷多彩、透明度好、胞質(zhì)顆粒和胞核結構清晰。染色時(shí)間長(cháng)(>1h),染色步驟多且復雜。適用于脫落細胞學(xué)檢查、上皮細胞或腫瘤細胞檢查。
蘇Wood Essence-伊red染色(Hematoxylin-eosin staining)
染液主要由堿性染料蘇Wood Essence和酸性染料伊red組成。染色效果穩定,透明度好,層次清晰,細胞核和細胞質(zhì)對比鮮明。不能顯示胞質(zhì)分化程度,細胞核極易過(guò)染,染色時(shí)間較長(cháng)(30-40min)。適用于組織病理學(xué)檢查、痰液涂片檢查等。
免疫組化染色(Immunohistochemical staining)
利用抗原抗體之間的特異性結合,用于研究細胞產(chǎn)物如分子、蛋白質(zhì)或糖蛋白的表達、定位、分布和遷移等。
熒光染色
使用熒光染料如Hoechst33258和Hoechst33342等,可以穿過(guò)活細胞膜與細胞核結合,在紫外光下將核染為藍色。
用于細胞核染色,可以區分活死細胞,但需要注意染色后盡快檢測,以避免熒光淬滅。